본 발명은 온-타겟 활성이 유지되고 오프-타겟 활성이 감소된 가이드 RNA 및 [0001] 이의 용도에 관한 것으로,

구체적으로, 오프-타겟 유전자 영역에 대해 원래 (original) 하나의 미스매치를 포함하는 가이드 RNA를 수정하여, 타겟 유전자 영역 및 오프-타겟 유전자 영역에 대해 각각 의도적인 (intentional) 하나 또는 두 개의 미스매치를 포함하는 가이드 RNA 및 이의 제조방법, 상기 가이드 RNA를 이용한 CRISPR 시스템의 정확도를 향상시키는 방법, 상기 가이드 RNA를 포함하는 점 돌연변이 (point mutation)로 야기되는 질환의 예방, 치료 또는 진단용 조성물, 상기 가이드 RNA를 이용한 유전자 표적 방법 및 유전자 교정 방법을 제공한다.